做ELISA标准曲线时需要注意这几个问题

做ELISA实验的老师们都知道ELISA标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果，甚至是关系到ELISA试剂盒实验的成败。今天就和大家一起来看下我们在做ELISA标准曲线时需要重点注意的细节问题。

1.设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度*陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

2.检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

3.标准曲线的样品数至少要保证有5个点。

4.做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。

5.样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

6.采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。